バカンティ氏の特許出願における脊髄損傷治療の実施例
(その意味で発明者がバカンティ氏と小島氏だけになっているのではないかと）
2016/1/16(土) 午後 9:57 [ ＪＩＳＡＩ ]」
2016/1/17(日) 午後 2:06 [ ＪＩＳＡＩ ]」
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【０３０４】
実施例６：ラット脊髄のＮＫ－１発現ニューロンの化学的除去によって低下した正常な
痛覚過敏反応の成体ＳＴＡＰ幹細胞による回復。
脊髄損傷には、痺れ感、錯感覚および疼痛を含めた高頻度の慢性神経知覚障害が複合的
に認められる。これらの外傷により生じる病理学的変化は広範囲に及ぶため、そのいずれ
の１つでも、その根底のある機序を理解し、有効な治療法を開発するのは複雑なものとな
る。ここでは、限定的であるが十分に定義されている感覚消失を生じた後、ストレスを加
えた成体幹細胞（刺激惹起性多能性獲得、ＳＴＡＰによって変化した細胞）を埋植するこ
とによって正常な状態に戻った極めて特異的な脊髄の細胞損傷について記載する。
ニューロキニン－１受容体（ＮＫ１Ｒ）発現ニューロンの大部分を除去するため、雄ラ
ット脊髄の髄腔内（ｉ．ｔ．）腔に特異性の高い細胞毒素ＳＳＰ－ＳＡＰ（２０μＬ、１
μＭ）を注射した。２～３週間後、フォン・フレイ線維による刺激に対する機械的痛覚過
敏と放射熱源から引っ込める動作の潜伏時間の短縮として現れる熱痛覚過敏とからなる、
後肢足底部へのカプサイシン（１μＬ、０．１％）注射に対する正常な強い痛覚過敏反応
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がほとんど認められなくなった。次いで、ＳＴＡＰ幹細胞のｉ．ｔ．注射を実施したとこ
ろ、個々の細胞の懸濁液であっても球状の細胞集塊であっても、その後１～２週間かけて
、振幅も経時変化も除去前の元の反応と同じであり、Ｋ－１ＲアンタゴニストであるＬ－
７３３，０６０（３００μＭ）のｉ．ｔ．注射によって完全に抑制された。痛覚過敏機能
が回復したラットの腰髄の免疫細胞化学検査では、後角全体にわたってＮＫ－１Ｒの染色
が認められた。したがって、ＳＴＡＰ幹細胞は、特異的な脊髄ニューロン喪失後に正常な
機能を回復させることが可能であり、脊髄損傷の治療法のモデルになるものと思われる。
ストレス誘導性無痛覚を最小限に抑え、ベースラインとなる未処置の初期の行動データ
を得るため、成体雄Ｓ－Ｄラットを最初、４～５日間ハンドリングして試験活動領域に慣
らした。一方の後肢足底表面を１５ｇのフォン・フレイ線維（ＶＦＨ）で３秒ごとに１０
回探索することにより、触覚に対する反応性を決定した。治療もカプサイシン注射も実施
していないベースライン感度は、探索１０回当たり約１～２回の肢引っ込め動作に相当す
るものであった。放射熱源からの肢引っ込め動作の潜伏時間（ハーグリーブス法：カット
オフ時間は１８秒に設定）によって熱感度を明らかにした。ベースライン潜伏時間は約１
６秒であった。髄腔内注射を実施する前、未処置ラットの後肢へのカプサイシン注射に対
する反応は、触覚がＶＦＨ探索１０回当たり６回の引っ込め動作、熱が潜伏時間６秒であ
ることがわかった。
３０ｇの針を使用し、大部分のＮＫ１－Ｒ発現脊髄ニューロンを除去するＳＳＰ－ＳＡ
Ｐ（修飾Ｐ物質－サポリンコンジュゲート）（Ｍａｎｔｙｈら）またはその不活性類似体
であるＢｌａｎｋ－ＳＡＰ（サポリンとコンジュゲートしたナンセンスペプチド）を送達
する仙骨法により髄腔内注射を実施した。
数週間後、ＳＳＰ－ＳＡＰ処置個体（Ｂｌａｎｋ－ＳＡＰ処置個体ではない）のカプサ
イシンによる急性の反応亢進が消失したとき、腰髄のＳＡＰコンジュゲートを注射した領
域と同じ領域に刺激惹起性多能性活性化（ＳＴＡＰ）幹細胞（図２６を参照されたい）を
注射した。
カプサイシン注射後の触覚刺激および熱刺激に対する反応をさらに５週間追跡し、その
時点でラットにペントバルビタール（７５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で麻酔をかけ、冷生理
食塩水、次いで４％パラホルムアルデヒドを経心灌流した。脊髄を厚さ５０μｍに薄切し
、抗ＮＫ１－Ｒおよび抗ニューロン一次抗体：［１％のＮＤＳおよび０．３％のＴｒｉｔ
ｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳに溶かしたウサギ抗ＮＫ－１Ｒ（ロット番号０１１Ｍ４８
３ｇ／ｍｌ）およびマウス抗ＮｅｕＮ（ロット番号ＬＶ１８２５８４５、Ｍｉｌｌｉｐｏ
ｒｅ社、ビレリカ、マサチューセッツ州）１：５００（２μｇ／ｍｌ）］で染色し、次い
で、十分に洗浄し、相関する２°Ａｂ［１％のＮＤＳおよび０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ
－１００を含むＰＢＳに溶かしたロバ抗ウサギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５（ロット
番号８１９５７２）およびロバ抗マウスＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（ロット番号１
１１３５３７）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、グランドアイランド、ニューヨーク州、米国
）、ともに１：１０００（２μｇ／ｍｌ）］中でインキュベートした後、蛍光顕微鏡で観
察した。
各実験グループ（ｎ＝３／グループ）の表層（ＩおよびＩＩ）および深部（ＩＩＩ～Ｖ
）の薄片について１組織切片当たりのＮＫ－１およびＮｅｕ－Ｎ免疫陽性細胞体の総数を
カウントした。結果を、ＳＳＰ－ＳＡＰ（または溶媒）を投与し幹細胞治療を実施したラ
ットまたは実施しなかったラットの表層および深部の薄片中の生存ニューロンの平均百分
率で表す。
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低下によって示される機械的痛覚過敏の減少がみられる（図２７）。脊髄幹細胞を埋植し
てから５週間後、カプサイシン誘導性痛覚過敏の回復がみられる。幹細胞埋植物により、
ＳＳＰ－ＳＡＰ処置ラットの痛覚過敏反応が未処置ラットおよびＢｌａｎｋ－ＳＡＰ処置
対照のものに戻った（図２８）。幹細胞埋植物によってカプサイシン感受性が回復した場
合、ＮＫ１－Ｒの特異的アンタゴニストの効力の増大がみられる（図２９）。
ＳＳＰ－ＳＡＰは、脊髄のＮＫ１Ｒ発現ニューロンを除去する効果が高く、それにより
後肢に注射したカプサイシンに対する初期痛覚過敏反応を実質的に消失させる。ＳＴＡＰ
幹細胞を送達することにより、ＳＳＰ－ＳＡＰ処理ラットのカプサイシンに対する「正常
な」痛覚過敏性の触覚および熱反応が回復する。Ｂｌａｎｋ－ＳＡＰの注射により痛覚過
敏反応性に変化がみられなかったラットでは、ＳＴＡＰ幹細胞の送達はカプサイシンに対
する反応に何ら効果を示さなかった。ＳＴＡＰ幹細胞による痛覚過敏反応の正常化に伴っ
て、脊髄にＮＫ１Ｒ－ＩＲの回復がみられた。ＳＴＡＰ幹細胞で回復したラットでは、Ｎ
Ｋ１Ｒのアンタゴニストがカプサイシン痛覚過敏を抑制する効力が未処置ラットまたはＢ
ｌａｎｋ－ＳＡＰ投与ラットの１０～６０倍増強された。理論に束縛されることを望むも
のではないが、この現象は、回復したラットではＳＴＡＰ幹細胞によって誘導されたＮＫ
１Ｒのアンタゴニストの親和性または痛覚過敏反応のスキーム全体へのＮＫ１Ｒの結合の
差が変化したことにより起こったのではないかと考えられる。
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ これに限らず、７つの実施例で書かれているのは、いずれもバカンティ氏と
小島氏による実験の経過です。
これらが虚偽となると、それこそ刑事罰ですし、V-CELL社の出願の方では、
宣誓書まで出していましたので、自らのプロトコルによる実験には裏付けが
あるとの主張をしているということかと思います。
こちらの出願がどういう扱いになるのかは、まだまだこれからです。
■ そうこうするうちに、V－CELL社／ハーバード大による元々の特許出願
のほうが、５月１８日の FinalRejection からもう間もなく、期限の６か月
が経過しようとしています。
今週がその山場になるはずですが、今日時点では特にUSPTOのサイトに変化
はありません。
いつも変化が現れるのは、期限ぎりぎりの土壇場ですので、今回もそうなの
でしょうか・・・。
認められず「放棄」扱いになるのか、それとも請求項が縮減されて認容されるのか、はたまた、継続審査請求となるのか・・・。
要注目です。
